弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体构建方法探讨

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韦相才[1] 钟兴明[1] 郑焕钦[2] 陈观今[2]

[1]广东省计划生育科学技术研究所，广州510600 [2]中山大学基础医学院病原生物学部，广州510080

国际标准刊号：ISSN 1672-3619

国内统一刊号：CN 44-1503/R

摘　　要:

目的探讨构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体的方法，为建立基因敲除弓形虫基因突变株打下基础。方法用PCR方法扩增弓形虫SAG3基因同源序列，将所获得的1．53kb和2．81kb序列连接克隆插入TUB5／CAT质粒中，构建置换型打靶载体，采用PCR扩增、酶切分析鉴定。结果将SAG3基因中1．53kb和2．81kb两个同源序列分别插入TUB5／CAT质粒中，构建了弓形虫RH株5’SAG3-TUB5／CAT-3’SAG3置换型载体，经鉴定所获得的打靶载体结构准确。结论建立了弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体，并获得了弓形虫RH株SAG3基因置换型打靶载体，为分析弓形虫基因功能提供了可行的方法。