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口腔幽门螺杆菌基因定量测定方法的建立及其应用评价

《西部医学》2017年 第1期 | 别明江 严谨 王保宁 谢艳 祝捷 王馨田 王红仁 李明远 杨靖 李尤玲   四川大学华西基础医学与法医学院 四川成都610041 四川大学华西医院消化内科 四川成都610041 四川万可泰生物技术有限责任公司 四川成都610041 成都树德中学 四川成都610031 湖北医药学院附属人民医院感染性疾病科 湖北十堰442000 十堰市人民医院中西结合科 湖北十堰442000
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摘 要:目的建立一种通过口腔唾液的特异、灵敏测定幽门螺杆菌核酸DNA的荧光定量PCR方法,并对其进行临床比对评价,为快速、准确、无创检测幽门螺杆菌感染提供新方法。方法以高度保守的幽门螺杆菌16srRNA序列为靶序列设计引物,经Blast软件对相似序列比对后,筛选出一对最优并与常见胃肠道细菌无交叉反应的引物;用荧光定量PCR扩增,对引物的退火温度及反应体系进行优化,确立反应条件;用已知菌落数(CFU/ml)的幽门螺杆菌菌悬液与唾液混合,梯度稀释扩增测试后进行灵敏度分析,建立幽门螺杆菌菌落数(CFU/m1)和荧光定量PCR循环数(Ct)关系的标准曲线;用乳酸杆菌、金黄色葡萄球菌、奈瑟氏菌、小齿类杆菌和唾液链球菌的基因进行特异性分析;利用此方法对150例来自临床胃镜中心的已完成尿素酶(URT)测定,并自愿参加研究者的口腔唾液标本进行收集检测,结果与同一病人的“C呼气实验检测结果进行比对分析,计算阳性率、阴性率和符合率。结果本检测方法的引物退火温度是62℃,反应体系10μl;对幽门螺杆菌的检测敏感度为10^2CFU/ml;本检查与乳酸杆菌、金黄色葡萄球菌、奈瑟氏菌、小齿类杆菌和唾液链球菌无交叉反应;本方法与14C呼气实验检测结果比较灵敏度74.12%,特异度86.15%,符合率79.33%,Kappa值为0.59。结论建立了口腔唾液幽门螺杆菌基因检测的分子诊断方法;该方法的特异性好,灵敏度高,为临床检测口腔幽门螺杆菌提供了一个无创、方便的新方法。
【分 类】【医药、卫生】 > 内科学 > 消化系及腹部疾病 > 胃疾病 > 幽门疾病
【关键词】 唾液 幽门螺杆菌 基因 定量检测
【出 处】 《西部医学》2017年 第1期 17-21页 共5页
【收 录】 中文科技期刊数据库

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