您的位置:网站首页 > 《中文科技期刊数据库》 > 医药卫生 > 临床医学 > 肿瘤学 > 摘要

人真核翻译起始因子3C基因的克隆及表达

《西部医学》2019年 第9期 | 赵谦 孙潇 罗真真 董怡萍 韩苏夏   西安交通大学第一附属医院肿瘤放疗科 陕西西安710061
★ 收藏 | 分享
  • 第1页
  • 第2页
  • 第3页
  • 第4页
论文服务:
摘 要:目的构建人真核翻译起始因子3C(Eukaryotic Translation Initiation Factor 3 Subunit C,EIF3 C)编码区全长的真核表达载体,转染FaDu人下咽鳞癌细胞系,为探讨EIF3C的生物学功能奠定基础。方法从人下咽鳞癌细胞系中提取总RNA,反转录成cDNA后用特异性引物PCR扩增EIF3C基因编码区全长(NM_001037808.2),双酶切后将EIF3C基因编码区全长克隆到载体pCMV-Blank上,构建真核表达载体pCMV-EIF3C。转染FaDu细胞系,real-timePCR和Westernblot检测EIF3C表达水平。将未加质粒转染FaDu细胞作为未加质粒转染组,加质粒pCMV-Blank作为pCMV-Blank转染组,以及加质粒pCMV-EIF3C作为pCMV-EIF3C转染组。分别将pCMV-EIF3C转染组EIF3C的mRNA和蛋白表达水平与未加质粒转染组、pCMV-Blank转染组进行比较,以及比较未加质粒转染组和pCMV-Blank转染组。通过生物信息学网站和软件分析人EIF3C氨基酸序列的理化性质、磷酸化位点、二级结构和三维结构。结果测序结果表明构建的真核表达载体pCMV-EIF3C中人EIF3C序列正确。转染实验表明载体pCMV-EIF3C转染组EIF3C的mRNA水平相比载体pCMV-Blank转染组升高7.08倍,未加质粒转染组升高8.02倍(P<0.001),且载体pCMV-EIF3C转染组蛋白表达水平相比于载体pCMV-Blank转染组和未加质粒转染组也显著升高(P<0.05)。EIF3C蛋白质由913个氨基酸组成,预测含有27个磷酸化位点,其二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。结论成功构建真核表达载体pCMV-EIF3C,并使EIF3C在下咽鳞癌细胞系中过表达。
【分 类】【医药、卫生】 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤病理学、病因学 > 肿瘤病理类型 > 上皮组织肿瘤
【关键词】 真核翻译起始因子3C 人下咽鳞癌细胞 基因克隆 真核表达
【出 处】 《西部医学》2019年 第9期 1328-1333页 共6页
【收 录】 中文科技期刊数据库