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应用噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒核心启动子结合蛋白

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张忠东[1] 成军[2] 钟彦伟[2] 王业东[2] 董菁[2] 陈天艳[2] 杨倩[2] 张树林[2] 刘妍[2]

[1]解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心,北京100039 [2]解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心,北京100039

《解放军医学杂志》

2004年第29卷第1期

摘　　要:

目的通过筛选乙型肝炎病毒(HBV)核心启动子(core promoter)结合蛋白，为HBV复制机制的研究探索新的途径。方法应用噬菌体表面展示技术，以HBV核心启动子的聚合酶链反应产物作为固相筛选分子，对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程，经噬斑的PCR扩增后，构建克隆载体，最后对所筛选克隆进行DNA序列分析和同源性搜索。结果噬菌体经富集后，从随机筛选的20个克隆中得到6个阳性克隆，成功构建了克隆载体。序列测定后经过同源性搜索，确定了和HBV核心启动子结合的肝细胞蛋白——羧肽酶N(CPN)。结论用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到HBV核心启动子的结合蛋白，分析了该蛋白的编码基因，为进一步研究HBV的复制机制创造了新的途径。 (共4页)