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大肠杆菌Ⅱ型丙酮酸激酶的表达·纯化及鉴定

《安徽农业科学》2017年 第25期 | 赵龙 周贤轩   合肥工业大学生物与食品工程学院 安徽合肥230009
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摘 要:[目的]获得大肠杆菌的Ⅱ型丙酮酸激酶。[方法]首先用MEGA7软件对不同生物丙酮酸激酶的编码基因进行聚类分析;通过聚合酶链式反应(PCR)扩增了大肠杆菌的Ⅱ型丙酮酸激酶基因pykA,将其克隆到pET28a栽体中,构建了重组质粒载体pET28a-pykA并在大肠杆菌B121中实现了Ⅱ型丙酮酸激酶(PykA)的高效表达;利用镍柱亲和层析系统纯化了PykA蛋白,并进行了高效液相色谱(HPLC)检测。[结果]聚类分析结果表明,大肠杆菌Ⅱ型丙酮酸激酶与其他原核生物的丙酮酸激酶氨基酸序列具有高度同源性。HPLC检测发现Ⅱ型丙酮酸激酶PykA在体外可以高效地将ADP转化为A11)。[结论]该研究获得了Ⅱ型丙酮酸激酶,为ATP的合成以及Ⅱ型丙酮酸激酶为基础的ATP再生系统的研究提供了参考。
【分 类】【生物科学】 > 分子生物学 > 基因工程(遗传工程) > 基因的表达
【关键词】 Ⅱ型丙酮酸激酶 蛋白表达 高效液相色谱 大肠杆菌 ATP再生系统
【出 处】 《安徽农业科学》2017年 第25期 142-144页 共4页
【收 录】 中文科技期刊数据库