小鼠胚胎干细胞α-GT基因打靶的研究

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张伟[1] 应大君[1] 朱楚洪[1] 蹇锐[2] 糜建红[1]

[1]第三军医大学解剖学教研室重庆市生物力学与组织工程重点实验室，重庆400038 [2]第三军医大学微生物学教研室，重庆400038

国际标准刊号：ISSN 0529-1356

国内统一刊号：CN 11-2228

摘　　要:

目的在小鼠胚胎干细胞上进行α-1，3半乳糖基转移酶(α-GT)基因打靶。方法利用长距离PCR和套式PCR从C57小鼠基因组DNA中克隆出α-GT基因组DNA片段，构建了针对α-GT基因外显子4的置换型基因打靶载体ploxp-GT，同源长臂(5．Okb)，同源短臂(3．97kb)，同源序列全长共约9．0kb。将打靶载体酶切线性化并以电穿孔方法转移入小鼠MEEs细胞。结果通过G418和Gancyclovir正负选择出171株ES细胞药物抗性克隆，Southern blot鉴定获得11个α-Gal(+/-)小鼠ES细胞克隆，重组频率为6．4％。结论上述方法能够完成α-GT基因敲除，为进一步完成α-GT基因敲除小鼠奠定了基础。