真核表达载体质粒pcDNA4/rhHIF-1α的构建与鉴定

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摘　　要:

目的 构建重组人缺氧诱导因子-lα（HIF-lα）真核表达载体质粒pcDNA4/rhHIF-1α,为进行人HIF-1α基因的克隆与表达及其抗体的制备研究奠定基础。方法 从人血细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成cDNA。设计两对引物分别调取目的基因片段A和B,与T载体连接后转化大肠杆菌JM109,LB平板筛选菌落,提取质粒。测序正确后双酶切先后克隆进入pcDNA4/HisMaxA载体。结果 获得重组质粒pcDNA4/rhHIF-1α,经PCR扩增获得的目的基因相对分子质量与预计相同,插入pcDNA4/HisMaxA载体部位正确。结论 重组的人HIF-lα真核表达载体质粒pcDNA4/rhHIF-1α构建成功,所选用的pcDNA4/HisMax可高表达目的基因,可用于人HIF-1α基因的克隆与表达及其抗体制备的研究。 (共3页)