采用基因打靶技术构建结核分枝杆菌新基因Rv0901缺失株的研究

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邱云青 鲍朗 赵计林 赵明才 张会东 吴悦涵

国际标准刊号：ISSN 1000-4718

国内统一刊号：CN 44-1187/R

摘　　要:

目的：利用基因打靶技术构建基因打靶载体和基因缺失株，用于结核分枝杆菌基因Rv0901功能的研究。方法：结核分枝杆菌标准株H37Rv体外培养，对其Rv0901基因及两侧序列进行体外扩增，连接载体及目的片段，切除目的基因，再引入筛选标志构建重组自杀质粒，分别用酶切及PCR鉴定；用电穿孔法将重组自杀质粒转入结核杆菌H37Rv株，用PCR鉴定。结果：经鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符，且为所需目的基因片段，成功切除靶片段；蓝白斑筛选证实标记基因插入片段插入方向正确；Rv0901基因缺失株用PCR鉴定成功缺失了目的基因片段2．5kb。结论：成功构建了用于结核分枝杆菌基因打靶的置换型载体和Rv0901新基因缺失株，为Rv0901基因功能的研究奠定了基础。