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伪狂犬病病毒鄂A株TK^—/gG^—/LacZ^+突变株的构建

《病毒学报》2001年 第1期 | 陈焕春 周复春 方六荣 何启盖 吴斌 洪文洲   华中农业大学 畜牧兽医学院 动物病毒实验室,湖北 武汉 430070
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摘 要:为了以国内地方分离株鄂A株为亲本构建伪狂犬病病毒双基因缺失株,采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切,构建了缺失主要毒力基因TK基因部分编码区的重组质粒pSTK1-4,进一步改造成为转移质粒pUCPB4。用HindⅢ将质粒pUCPB4线性化,然后与用EcoRI消化的伪狂犬病病毒鄂A株TK-/LacZ+突变株基因组DNA共转染PK-15细胞,待完全病变后,收毒作空斑试验,PCR筛选TK缺失的重组病毒。重组病毒空斑纯化3次,随机挑取空斑进行PCR扩增,证实所获得的病毒为均一的无TK-/LacZ+突变株污染的TK缺失的重组病毒。分别以TK缺失株病毒与鄂A野毒株为模板对TK基因进行PCR扩增,扩增产物经酶切分析和测序后发现:TK缺失重组病毒的TK基因缺失了205个碱基,XhoI和SalI位点消失,SmaI酶切片段发生变化。两种病毒在PK-15细胞上形成空斑的大小和增殖的滴度无明显的差别。进一步提取TK缺失突变株基因组DNA,与含gG-LacZ的转移质粒pUSKZ通过磷酸钙法共转染PK-15细胞,待完全病变后,在X-gal存在下筛选蓝斑,将挑取的蓝斑纯化3次后,对纯化的重组病毒进行TK、LacZ扩增,结果既能扩增出较以鄂A野毒株为模板扩增的要小的TK基因片段,同时又能扩增出LacZ基因,证实所得到的重组病毒为TK-/gG-/LacZ+突变株。此双缺失突变株的构建成功,为在我国最终根除伪狂犬病提供了有用的工具。
【分 类】【农业科学】 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 兽医基础科学 > 家畜微生物学(兽医病原微生物学) > 家畜病毒学
【关键词】 伪狂犬病病毒 鄂A野毒株 TK^-/LacZ^+突变株 TK缺失突变株 TK^-/gG^-/LacZ^+突变株
【出 处】 《病毒学报》2001年 第1期 69-74页 共6页
【收 录】 中文科技期刊数据库

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