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重组人Doppel蛋白的表达及其细胞毒性作用的研究

《病毒学报》2007年 第4期 | 李萍 韩俊 单冰 雷艳君 周伟 姜慧英 董小平   中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 传染病预防控制国家重点实验室 北京100052
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摘 要:Doppel(Dpl)蛋白是新近发现的PrP相关蛋白。根据GenBank公布的人PRNDcDNA序列设计合成特异性引物,用PCR方法从人外周血白细胞总DNA中扩增获得531 bp的人PRND完整基因序列,测序正确后克隆至表达载体,转化大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达重组人Doppel(rhDpl)蛋白。目的蛋白以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的60%以上。表达产物用Ni^2+亲和层析柱纯化及羟胺化学裂解法去除标签蛋白,SDS-PAGE检测证实,纯化的rhDpl蛋白相对分子量约为15 kD。Trypan Blue及MTT实验显示,在50μg/mL及以上剂量时,rhDpl蛋白具有抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长的作用,在100μg/mL及以上剂量时,rhDpl具有杀伤HeLa细胞的活性,呈现明显的剂量和时间依赖性。Hoechst33342荧光染色观察显示经rhDpl作用的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y呈现出细胞凋亡现象。这些结果提示Dpl蛋白具有体外细胞毒作用,并呈现明显的组织类型特异性。以上工作为进一步了解人Dpl蛋白体内外生物学作用奠定了基础。
【分 类】【生物科学】 > 分子生物学 > 基因工程(遗传工程)【医药、卫生】 > 基础医学 > 医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学) > 人体病毒学(致病病毒) > 其他病毒
【关键词】 Doppel蛋白 PRND基因 表达 细胞毒作用
【出 处】 《病毒学报》2007年 第4期 265-269页 共5页
【收 录】 中文科技期刊数据库

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