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基于颜色判定的RT-LAMP技术检测HCoV-NL63冠状病毒基因

《病毒学报》2016年 第1期 | 耿合员 汪圣强 谢晓谦 肖雨 张汀 谭文杰 苏川   无锡出入境检验检疫局中国检验检疫科学研究院(无锡)人体携带病原体研究室 无锡214101 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒病应急技术中心 北京102206 南京医科大学基础医学院江苏省现代病原生物学重点实验室 南京210029
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摘 要:建立了一种适合于国境口岸简便、快速、灵敏和特异检测人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的核酸检测方法。通过建立基于颜色判定的逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术,针对HCoV-NL63核衣壳蛋白(Nucleocapsid,N)基因序列设计出6条特异性引物,在等温条件下(63℃)进行扩增反应60min,在扩增前加入钙黄绿素作为反应指示剂,并结合浊度仪进行实时监测,以最终反应颜色变化作为结果判断标准。利用该方法对同种属其他人冠状病毒、诺如病毒、流感病毒进行检测,以分析该方法的诊断特异性。应用该方法对梯度稀释的HCoV-NL63病毒RNA进行检测,以分析该方法的诊断灵敏性,并与常规real-time RT-PCR方法进行比较。结果显示,本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法在短时间内(40min)即可达到对HCoV-NL63的快速检测。该检测方法与加入其它病毒RNA模板溶液颜色均不产生改变,具有较高的检测特异性。检测灵敏性最低检测下限为1 600拷贝/反应。本研究建立的基于颜色判定的RT-LAMP方法可实现对HCoV-NL63冠状病毒现场快速检测,具有在国境口岸以及基层医疗机构和疫区现场推广应用的潜力。
【分 类】【医药、卫生】 > 基础医学 > 医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学) > 人体病毒学(致病病毒) > 其他病毒
【关键词】 HCOV-NL63 RT-LAMP 快速检测
【出 处】 《病毒学报》2016年 第1期 56-61页 共6页
【收 录】 中文科技期刊数据库

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