生物学 >> 第四军医大学学报 >> 2004年25卷5期 >> 摘要

细菌内同源重组高效制备人突变p27基因重组腺病毒

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陈珺[1] 徐少勇[1] 邓长生[2] 王家宁[1] 黄永章[1]

[1]郧阳医学院附属人民医院消化内科,湖北十堰442000 [2]武汉大学中南医院消化内科,湖北武汉430071

《第四军医大学学报》

2004年第25卷第5期

摘　　要:

目的：利用细菌内同源重组法，构建含人突变p27(hp27mt)基因重组腺病毒．方法：hp27mt自载体pORF9-hp27mt中切出，亚克隆至穿梭质粒pShuttle—CMV中，形成转移质粒pShuttle-CMV—hp27mt；然后再用PmeI线性化的pShuttle-CMV—hp27mt转化含腺病毒骨架质粒pAdeasy—1的超感受态BJ5183，使其在细菌内发生同源重组．重组质粒鉴定正确后经PacI酶切，转入Ad293细胞，包装成重组腺病毒Adhp27mt．采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定，用紫外分光光度计进行滴度测定，结果：用含pShuttle—CMV—hp27mt转化含pAdeasy—1的超感受态BJ5183后，可获得约30％的阳性重组质粒．PCR检测表明重组腺病毒含有目的基因．滴度为7．95×10^15pfu／L.结论：用细菌内同源重组法可快速、高效制备均一的高滴度重组腺病毒．为研究p27mt对消化道肿瘤的治疗奠定了基础． (共4页)