利用多重筛选机制提高山羊乳腺上皮细胞基因打靶的效率

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沈伟[1] 闵令江[2] 李兰[3] 潘庆杰[4] 吴晓洁[5] 周艳荣[5] 邓继先[5]

[1]军事医学科学院生物工程研究所，北京100071／／西北农林科技大学动物科技学院，杨凌712100 [2]西北农林科技大学动物科技学院，杨凌712100／／山东莱阳农学院动物科技学院，莱阳265200 [3]军事医学科学院生物工程研究所，北京100071／／山东莱阳农学院动物科技学院，莱阳265200 [4]山东莱阳农学院动物科技学院，莱阳265200 [5]军事医学科学院生物工程研究所，北京100071

国际标准刊号：ISSN 0379-4172

国内统一刊号：CN 11-1914

摘　　要:

构建了山羊β-酪蛋白基因座基因打靶载体pGBC—GFP—neo，载体包含了正负筛选标记基因neo和tk，以及无启动子的GFP基因。打靶载体线性化后用脂质体包裹转染山羊乳腺上皮细胞，利用G418和GANC进行抗性细胞克隆的药物筛选，共得到抗性细胞克隆51个，对抗性克隆利用激素诱导β-酪蛋白基因启动子指导GFP表达，得到GFP表达阳性细胞克隆17个，对其中4个生长状态良好的克隆PCR检测验证后用于核移植，克隆胚发育率为59．5％，部分发育到桑椹胚或囊胚。