基础医学 >> 中国病原生物学杂志 >> 2007年2卷6期 >> 摘要

金葡菌野生株SEB基因的亚克隆及其原核表达

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高世同[1] 张仁利[1] 刘会娟[2] 秦莉[1] 耿艺介[1] 黄达娜[1] 吴少庭[1]

[1]深圳市疾病预防控制中心,广东深圳518020 [2]中山大学医学院达安基因诊断中心,广东广州510089

《中国病原生物学杂志》

2007年第2卷第6期

摘　　要:

目的亚克隆金葡菌野生株S407030肠毒素B（SEB）基因，并在大肠埃希菌（E．coli）中表达，以获得重组SEB（rSEB）蛋白。方法将含有SEB基因的质粒pMD-18T／SEB双酶切获得目的片段，插入表达载体pGEX-4T-2中构建重组子pGEX-4T-2／SEB，并转化E．coliJM109感受态菌，阳性克隆以双酶切和PCR法鉴定；含重组质粒的工程菌以IPTG诱导表达rSEB蛋白；表达产物进行SDS-PAGE分析，并采用B-PERGST融合蛋白试剂盒纯化重组rSEB，Western blot鉴定其免疫反应性。结果重组质粒经双酶切和PCR扩增鉴定均获得约705bp的基因片段，与预期结果相一致；诱导表达的含GST的融合重组rSEB蛋白分子质量单位约为53ku，纯化后作SDS-PAGE电泳显示一条蛋白带，Western blot显示rSEB能够被兔抗SEB抗体识别。结论金葡菌野生株SEB在大肠埃希氏菌中得到有效表达，并获得电泳级纯度的重组rSEB，重组蛋白具有一定的免疫活性，为进-步研究其生物毒性与开发诊断试剂提供了生物材料。 (共4页)