人β防御素4基因的合成及其真核表达载体的构建

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曹玉红[1] 张国成[1] 张光运[2] 丁翠玲[1] 李茹英[1]

[1]第四军医大学西京医院儿科,陕西西安710032 [2]第四军医大学西京医院神经内科,陕西西安710032

国际标准刊号：ISSN 1008-8199

国内统一刊号：CN 81-1574

摘　　要:

人类β防御素（human13defensin，HBD）是一类具有广谱抗微生物活性的小分子抗菌肽，具有杀伤细菌、真菌、病毒、原虫、肿瘤细胞以及免疫调节等多重活性，而且其作用机制独特，至今尚未发现病菌株对其产生耐药性，因此成为国内外众多学者研究的热点。目前发现的HBD有4种，即HBD1～4。已证实HBD4对多种病原菌有杀灭作用，尤其对现在耐药严重的肉葡萄球菌和绿脓杆菌有强大的杀菌作用，在上皮及黏膜尤其是呼吸道黏膜的防御、抵抗病原微生物感染方面起着重要作用。本研究拟通过人工合成HBD4基因并构建其真核表达载体，为HBD4基因的转染和表达以及抗菌治疗的研究奠定基础。[第一段]

关键词:

人β防御素4 重叠延伸PCR 基因合成基因克隆

为HBD4基因的转染和表达以及抗菌治疗的研究奠定基础。1 材料和方法1．1 试验材料rTaq酶、4×dNTP、限制性内切酶BamHI、EcoRI、T4 DNA连接酶、pMD18一T质粒购自大连宝生物工程有限公司，质粒pcDNA3．1(+)、大肠杆菌DH5ot、XL．10由第四军医大学生物化学与分子生物学实验室惠赠，琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒、质粒小提试剂盒为天为时代公司产品，氨苄西林(氨苄青霉素)及其他试剂均购自华美生物工程公司。基因测序由上海生工生物工程技术服务有限公司完成。寡聚核苷酸片段由北京奥科生物技术有限责任公司合成，并经聚丙烯酰胺凝胶电泳法纯化。1．2 试验方法1．2．1 引物设计与基因合成根据基因库中的HBD4 收稿日期基金项目作者简介通讯作者基因序列，设计6段互补寡聚核苷酸片段D1～D6，寡聚核苷酸长度为60～32 bp不等，正负链之间互补碱基均为10bp。其中D1、D6用作引物，其5 端分别设计有BamHI和EcoRI酶切位点并引入......