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具有抗HIV活性的突变型天花粉蛋白TCSYFF-KR的构建及原核表达

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安群星[1] 贾宁[2] 张献清[1] 陈蕤[1] 夏爱军[1] 易静[1] 穆士杰[1]

[1]第四军医大学西京医院输血科,陕西西安710032 [2]解放军总医院感染管理与疾病控制科,北京100853

《生物技术通讯》

2008年第19卷第1期

摘　　要:

目的：构建具有抗HIV活性的突变型天花粉蛋白（TCS），并将其在原核系统内进行表达与纯化。方法：借助计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇（YFF81-83和KR173-174），并依此设计适当的突变引物；以栝楼基因组DNA为模板，利用重组PCR技术扩增双突变型TCS全长基因，经BamHI和EcoRI双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接，转化感受态大肠杆菌DH5α，提取质粒进行酶切鉴定及测序；将所获阳性重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达后，对表达产物进行Western印迹鉴定；用Ni-NTA亲和层析柱对所获突变型TCS蛋白进行纯化。结果：构建了突变型TCSYFY-KR，并获得了该蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达；经Ni-NTA亲和层析柱纯化，产生大量均一的突变型TCS蛋白。结论：TCS的定点突变及其在原核系统内的表达，为基因工程方法改造TCS提供了一条新途径。