摘 要:
背景：腺病毒具有免疫原性，可被机体快速免疫清除，导致目的基因失去表达，这是其作为基因治疗载体的主要缺陷。一些特定的细胞，如角膜上皮细胞和睾丸Sertoli细胞能表达和分泌Fas配体(FasL)，诱导带有Fas分子的免疫细胞发生凋亡。目的：构建FasL和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)共表达PCA13质粒用于腺病毒的包装，以进一步观察FasL对腺病毒载体的免疫保护作用。方法：利用内源性核糖体进驻位点(IRES)，通过感受态细胞的制备和转化、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳以及限制性内切酶等多种基因工程技术，经多步亚克隆后完成能同时表达：FasL和iNOS基因的多顺反子腺病毒表达载体PCA13／FasL-IRES-iNOS的构建。结果：新质粒PCA13／FasL-IRES-iNOS经限制性内切酶酶切后得到1600bp(600bp FasL，1000bp IRES)和4000bp(iNOS)的相应基因片断，基因序列经测定与基因文库报道相符。结论：成功构建了多顺反子腺病毒表达载体PCA13／FasL-IRES-iNOS，为门脉高压症的基因治疗打下了基础。
