生物学 >> 现代生物医学进展 >> 2006年6卷10期 >> 摘要

CD真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

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张巨峰[1] 韦芳[1] 李惠明[1] 黄陈[2] 于慧[1] 裘玮[1] 黄倩[1]

[1]上海交通大学附属第一人民医院中心实验室,上海200080 [2]上海交通大学附属第一人民医院普外科,上海200080

《现代生物医学进展》

2006年第6卷第10期

摘　　要:

目的：构建含自杀基因胞嘧啶脱氨酶（CD）的真核表达载体pcDNA3．1／HA—myc-His（-）Z—CD，并进行哺乳动物细胞HEK293转染研究。方法：以本实验室保存的含CD基因全长的质粒为模版，用PcR方法扩增CD基因阅读框序列，并定向克隆到带有HAtag的pcDNA3．1／HA—myc-His（-）Z载体上，使目的基因与HAtag在同一阅读框。重组体质粒经EcoRI和BamHI双酶切鉴定，并对插入的CD基因片段进行测序，将鉴定好的阳性重组质粒pcDNA3．1／HA—myc-His（-）Z—CD用脂质体介导转染HEK293，提取细胞蛋白，western blot检测CD基因的表达情况.结果：阳性重组质粒pcDNA3．1／HA—myc-His（-）ZCD经Eco砌和BanHI双酶切后，获得约为5．5kb片段和1．3kb插入片段，序列分析表明插入的片段与GenBank发布的序列一致．western blot检测到CD基因的表达。结论：成功构建了含自杀基因CD的真核表达质粒。 (共3页)