丙型肝炎病毒核心蛋白基因真核表达质粒的构建和表达

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摘　　要:

目的：构建丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白真核表达质粒，并在HepG2细胞中稳定表达。方法：采用RT—RCR方法从丙型肝炎患者血清中得到HCVC区的cDNA序列，然后克隆入pcDNA3．0载体，构建真核表达质粒pcDNA—HCV，并进行酶切鉴定和测序鉴定；采用脂质体转染技术将pcDNA—HCV稳定转染于HepG2细胞系，并用G-418进行筛选；采用Westem Blotting方法和竞．覆细胞化学方法检测HepG2细胞中HCV核心蛋白表达情况。结果：从HCV感染者血清中扩增得到的503bpHCVcDNA序列，属于HCV1型基因C区，并成功构建了真核表达质粒pcDNA—HCV。经Western blotting和免疫细胞化学检测，稳定转染的HepG2细胞中有HCV核心蛋白的表达。结论：成功构建HCV核心蛋白真核表达质粒pcDNA-HCV，并可以在真核细胞HeDG2中稳定表达。