生物学 >> 江西医学院学报 >> 2007年47卷5期 >> 摘要

EGFR靶向shRNA真核表达载体的构建与鉴定

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潘泽政[1] 杨小红[1] 贺慧为[3] 张晓春[2] 李金生[1]

[1]南昌大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 [2]南昌大学第二附属医院分子中心 [3]江西省人民医院ICU,南昌330006

《江西医学院学报》

2007年第47卷第5期

摘　　要:

目的构建干扰表皮生长因子受体（EGFR）的pSilencer^TM-EGFR表达质粒，转染入非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞株，为观察对EGFR的沉默效应奠定基础。方法①根据人类EGFR的mRNA序列，设计4条干扰片段，以pSilencer^TM2.1-U6-hygro质粒为载体，构建shRNA重组体，转化入DH5α大肠杆菌，提取质粒，进行酶切和测序鉴定；②采用脂质体2000分别转染人类非小细胞肺癌细胞株A549，用潮霉素（Hygromycin B）筛选阳性克隆。结果①经酶切及测序鉴定，成功构建了针对EGFR的4种重组干扰质粒，分别命名为pSilencer^TM-EGFRⅠ、pSilencer^TM-EGFRⅡ、pSilencer^TM-EGFRⅢ和pSilencer^TM-EGFRⅣ；②成功转染A549细胞，经筛选后得到稳定表达的细胞克隆。结论利用RNAi技术原理成功构建针对EGFR的shRNA重组质粒，并转染入A549细胞。 (共4页)