抑制端粒酶活性的pSUPER RNAi系统的构建

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李燕 李明远 蒋中华 肖丽英 李婉宜 李虹

四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,四川成都610041

国际标准刊号：ISSN 1672-3511

国内统一刊号：CN 51-1654/R

摘　　要:

目的构建抑制端粒酶活性的siRNA表达载体。方法化学合成2段编码短发夹RNA序列的、靶向端粒酶hTERT基因的寡核苷酸，各64个碱基，退火，克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切同时CIP处理后的pSUPER载体的polⅢH1启动子的下游，重组构建RNAi质粒，同时设立非特异对照．结果重组构建的pSUP—hTE载体经双酶切电泳分析及插入基因片段序列分析，结果表明64个碱基成功插入到预计位点，并且序列完全一致。结论载体的成功构建，为进一步研究其对端粒酶活性的抑制作用打下基础。同时使我们发展了在体内合成siRNA的方法，这项技术能广泛的用在分析基因功能、肿瘤治疗等，更加便捷地把RNAi技术用于细胞培养和哺乳动物研究。