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H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆与表达

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李茜[1] 刘新文[2] 刘水清[3] 高轩[1] 李明义[2]

[1]河北农业大学动物科技学院,河北保定071000 [2]青岛易邦生物工程有限公司,山东青岛266032 [3]内蒙古农业大学,内蒙古呼和浩特010018

《上海畜牧兽医通讯》

2007年第卷第2期

摘　　要:

根据GenBank中收录的H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列设计合成了一对引物AI-N1/AI-N2,利用RT-PCR方法扩增AIVNS1基因并克隆到pMD18-T载体上,对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定,与GenBank中收录的其他分离株NS1基因进行序列比较分析,同源性达96%~99%,含有NS1基因的1个开放性阅读框（ORF）。将该基因克隆到pET-28a中构建NS1基因原核表达质粒pET/NS1,转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞,在IPTG诱导下获得了预期的蛋白表达,所表达的蛋白质分子质量约为30kD。Western-blotting结果表明表达的NS1蛋白有良好的生物学活性,与H5N1 AIV感染鸡血清发生特异性反应,而与H5N1 AIV灭活疫苗免疫鸡血清无反应,为建立区分野毒AIV感染家禽与AIV灭活疫苗免疫家禽ELISA方法的建立提供了生物学材料。 (共3页)