摘 要:
目的：研究VacA-HpaA融合蛋白的鸡卵黄抗体（IgY）的理化特性和生物学活性,为制备集预防与治疗为一体的抗H.pylori感染的制剂奠定基础。方法：以纯化的VacA-HpaA融合蛋白免疫产蛋鸡,水稀释法获取蛋黄抗体（VacA-HpaAIgY）。（1）用硫酸铵沉淀法纯化IgY后,用SDS-PAGE分析其纯度,Bradford法测定蛋白含量。（2）用间接ELISA法检测该IgY的耐热性、耐酸性及其对酶消化的耐受作用。（3）采用Western blot分析IgY的特异性并检测其效价。（4）用MTT法检测不同浓度VacA-HpaAIgY对细胞毒活性的中和作用。（5）用扫描电镜观察VacA-HpaA IgY对AGS细胞粘附的中和作用。结果：（1）该IgY纯度为60%,蛋白浓度为22g/L;（2）具有一定的耐热性、耐酸性和耐胃蛋白酶能力;（3）Western blot分析显示IgY的特异性,在相对分子量约27000和30000处出现在相应的条带;（4）该IgY对VacA细胞毒活性有中和作用,且具有量效性和时效性;（5）IgY可阻止H.pylori菌体蛋白的粘附作用。结论：该IgY具有良好的理化和生物学特性,可用于制备抗H.pylori感染的防治制剂。
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