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哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆及原核表达

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张崇文[1,2] 于涟[2] 毛芝娟[1,2] 褚武英[1,2] 钱荣华[1,2]

[1]浙江大学生物医学工程学院,浙江杭州310027 [2]浙江大学动物预防医学研究所,浙江杭州310329

《水产学报》

2006年第30卷第1期

摘　　要:

根据哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK的基因序列设计一对引物，应用聚合酶链式反应（PCR）方法，从分离自患病大黄鱼的哈维氏弧菌基因组中扩增获得一段约800bp的序列。将其克隆到pGEM-Teasy载体，测序结果证明该序列是哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因。用PCR方法去除其信号肽序列，定向克隆到原核表达载体pGEX-4T-2构建重组表达质粒pGEX-4T-OmpK。IPTG诱导后能够在大肠杆菌BL21中高效表达分子量约为53kD的GST-OmpK融合蛋白。用纯化后的融合蛋白免疫新西兰兔获得了高效价的抗血清。Western-blotting分析表明，它与从哈维氏弧菌中提取的约27kD的外膜蛋白能够发生特异反应，提示外膜蛋白OmpK可能是哈维氏弧菌的重要保护性抗原之一。 (共6页)