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罗非鱼肝脏中超氧化物歧化酶的提取、纯化与分析

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吴燕燕[1] 李来好[1] 郝志明[2] 岑剑伟[1] 陈胜军[1] 周婉君[1] 杨贤庆[1] 刁石强[1]

[1]中国水产科学研究院南海水产研究所,广东广州510300 [2]国家食品质量监督检验中心,广东广州510110

《水产学报》

2007年第31卷第4期

摘　　要:

以奥尼罗非鱼肝脏为原料,研究加热法提取超氧化物歧化酶（SOD）的工艺条件,丙酮沉淀回收酶法和Hitrap^TM Q FF阴离子柱纯化Cu,Zn-SOD,并对其酶学性质进行分析。结果表明加热法提取SOD时,在缓冲液中加入10mmol·L^-1CuCl2,调节pH为5.6,65℃进行加热处理,可以提高SOD粗酶的稳定性和得率,其得率为57%,粗酶比活为（2580±6）U·mg^-1。对酶的酶学性质研究表明纯化后SOD比活为（4895±2）U·mg^-1,SDS-PAGE电泳为单一蛋白酶带,分子量为36ku,最大紫外吸收波长为265nm。该酶在pH6.0～9.0具有较好的稳定性,在75℃以下稳定,具有较好的耐热性。氰化钾、脲素、β-巯基乙醇、H2O2、对Cu,Zn-SOD具有明显的抑制作用;EDTA浓度小于3mmol·L^-1时,对Cu,Zn-SOD活性有明显增强作用,EDTA浓度大于3mmol·L^-1时,对Cu,Zn-SOD活性有抑制作用;DTT的修饰使Cu,Zn-SOD活性显著增加。为进一步研究和应用罗非鱼肝脏SOD提供了基础参数。 (共7页)