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亚洲璃眼蜱唾液腺差异表达基因文库的构建及分析

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程天印[1,2] 周金林[1] 周勇志[1] 施启顺[2] 林矫矫[1]

[1]中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所,上海200232 [2]湖南农业大学动物科技学院,湖南长沙410128

《中国预防兽医学报》

2006年第28卷第3期

摘　　要:

从单雌蜱克隆群中挑选未吸血雌蜱60只，随机分成两组。未吸血组直接剖取唾液腺．半饱血组于蜱吸血第5d采集，分离唾液腺。Trizol法提取总RNA，经第一链合成、LD—PCR、RasⅠ酶切、接头连接和抑制消减杂交（SSH）等步骤，获得差异表达基因的cDNA片段。将纯化的cDNA片段与pGEMT—Easv我体连接，转化DH5a，获得204个白色菌落。扩增检查表明，136个克隆含有插入片段，片段大小为250bp-850bm，测出有效序列120个。由10个cDNA片段的RT—PCR检查结果初步断定，本研究消减效果良好。由网上资源分析得：21个片段与其他蜱的基因，19个片段与按蚊、库蚊、钩虫、奥斯特线虫等其他吸血寄生虫的基因，9个与果蝇的基因具有同源性。