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H7亚型禽流感病毒HA基因在杆状病毒系统中的表达

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郝婧[1,2] 邓国华[1] 姜永萍[1] 曲站红[1] 王桂芹[1] 郝永清[2] 陈化兰[1]

[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室／兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江哈尔滨150001 [2]内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古呼和浩特010018

《中国预防兽医学报》

2007年第29卷第4期

摘　　要:

利用PCR反应，以特异性引物扩增禽流感病毒去除信号肽的H7亚型HA密码子优化基因，克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-HTB中，转座DH10感受态细胞，通过蓝白斑筛选、PCR鉴定获得阳性克隆，然后提取基因组Bacmid，转染Sf9昆虫细胞，得到含H7亚型流感病毒HA基因的重组杆状病毒opti-H7HA-Bac。重组杆状病毒接种Sf9昆虫细胞，待绝大部分细胞产生细胞病变后收获细胞，细胞裂解产物经血凝试验、SDS-PAGE及Western blot分析证实，密码子优化的H7HA基因在重组杆状病毒opti-H7HA-Bac感染Sf9细胞后获得高效表达，且具有良好的蛋白活性及特异免疫反应原性。 (共4页)