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绵羊肺腺瘤病病毒NM株衣壳蛋白基因的克隆与原核表达

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斯日古楞[1] 么宏强[1] 马学恩[1] 王升启[2]

[1]内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古呼和浩特010018 [2]中国军事医学科学院,北京100850

《中国预防兽医学报》

2007年第29卷第8期

摘　　要:

为了建立原核高效表达体系,从自然感染绵羊肺腺瘤病病毒内蒙（NM）株的肺肿瘤组织中提取基因组DNA,应用PCR技术扩增编码gag基因衣壳蛋白（Capsid protein,CA）基因,构建CA蛋白的重组表达质粒pGEX-4T-1-CA,经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转化入Ecoli BL21 CodonPlus中,在IPTG的诱导下表达,表达产物用SDS-PAGE分析鉴定。结果表明,该基因可以在大肠杆菌中以可溶性和包涵体形式高效表达,表达的CA融合蛋白表观分子量约为37 Ku,表达量占全菌蛋白的20%,利用谷胱甘肽Sepharose 4B亲和层析柱纯化可以得到具有较高纯度的表达蛋白,是一种理想的免疫原。本研究为下一步利用重组蛋白研制绵羊肺腺瘤病病毒NM株的单克隆抗体及诊断试制盒等奠定了基础。 (共5页)