摘 要:
为了获得猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type2，PCV-2）衣壳蛋白（Cap）基因3’端396bp的片段与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位（LTB）成熟肽编码区融合基因的高效表达，并检验重组蛋白的免疫保护效果。以含PCV-2全基因组的pMDTPCV-2质粒为模板，用PCR的方法扩增PCV-2Cap基因，并将其克隆到pET28a（＋）中，构建得到pET-Cap质粒，利用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切切下Cap基因3’末端396bp的片段，插入到pET-LTB原核表达质粒LTB基因的3’末端，从而构建pET-LTBACap原核表达质粒，将其转化大肠杆菌BL21（DE3）pLysS后，用IPTG诱导重组菌，用SDS-PAGE电泳和Western blot检测诱导物。表达产物经初步纯化后用昆明系小白鼠做免疫保护实验。结果表明：pET-LTB△Cap重组融合表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达，融合蛋白分子量约为29Ku，表达量约占茵体蛋白的36．67％，融合蛋白能被PCV-2阳性血清识别。攻毒后，所有小鼠临床表现正常。用PCR检测有1／8的免疫小鼠感染了PCV-2，而对照组8只小鼠都感染了PCV-2。PCV-2Cap基因3’端396bp的片段与LTB基因融合能实现高效表达，表达产物免疫的小白鼠可抵抗PCV-2的攻击。此研究为PCV-2基因工程疫苗的研究奠定了基础。 (共5页)
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