猪肺炎支原体中国分离株热休克蛋白Hsp70（Dnak）的全基因克隆及C末端基因的表达与免疫活性分析

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摘　　要:

猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，MHP）是猪气喘病的病原。DnaK又称为热休克蛋白Hsp70，具有分子伴侣和免疫的作用。以MHP中国分离株Yin-1为模板，扩增了DnaK基因的全序列，将该序列克隆到pMD18-T载体上并测序。测序结果Yin-1株DnaK基因即Hsp70基因全长1803bp，编码600aa，第631～633位TGA在支原体编码色氨酸而不是作为终止密码子。将该序列与多种致病支原体DnaK基因进行分析比较，发现Yin-1株与232株、J株、7448株等MHP菌株的DNA同源性为99.3％～99．4％，氨基酸同源性为99．2％～99.3％，而与非同种支原体的DNA和氨基酸同源性仅为64．5％～74．4％和59.3％～77％。这表明DnaK基因在种内高度保守，种间差异较大。以pET28a为载体构建重组质粒，原核表达DnaKC末端大小为1kb左右的基因，对表达的蛋白进行纯化后，通过Westernblot检测它的免疫活性。原核表达得到大小为41ku的目的蛋白．经Westernblot证实．纯化蛋白可与MHP阳性猪血清反应，具有免疫活性。 (共5页)