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靶向抑制人木糖基转移酶-I基因的shRNA真核表达载体的构建
石宏 王洁 王旭 顾洪涛 侯亚丽 于利洁 河北医科大学口腔医院病理科 河北石家庄050017
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摘要：目的构建靶向抑制人木糖基转移酶-I（XT-I）基因的短发夹状RNA（shRNA）真核表达载体，为探讨唾液腺肿瘤性肌上皮细胞合成及分泌蛋白多糖（PG）的研究奠定基础。方法根据GenBank提供的XT—I基因序列，设计短链寡核苷酸，化学合成后经退火形成双链DNA片段，克隆到Pgenesil一1载体中，构建shRNA真核表达载体WJ1-WJ6，行酶切及核酸测序鉴定；将构建的XT—I特异性shRNA表达载体转染体外培养的人唾液腺腺样囊性癌细胞株ACC—M，在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达，流式细胞术检测转染效率，并采用半定量RT—PCR和Westem blot分别检测转染后细胞XT—I基因mRNA和蛋白表达水平的变化。结果经酶切、连接后构建的6个质粒命名为WJ1、WJ2、WJ3、WJ4、WJ5、WJ6。酶切及核酸测序鉴定证实，构建的shRNA表达载体WJ1-WJ6序列正确；转染WJ1-WJ6后ACC—M细胞均可表达绿色荧光；流式细胞术测定转染效率平均为50．26％；RT—PCR结果显示，WJ3显著抑制XT—ImRNA的表达，抑制率为72．39％；Western blot结果显示，WJ3有效抑制XT—I的蛋白表达，抑制率为70．18％。结论成功构建靶向抑制XT—I的shRNA真核表达载体wJ1-WJ6，其中WJ3可高效抑制XT—I基因mRNA及蛋白水平的表达，为唾液腺肿瘤中PG的RNAi研究奠定了基础。 | |
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| 格式：PDF 页数：5 页 页码范围：206-210页 | ||
| 学科分类： | ||
| 关 键 词：人木糖基转移酶-I 短发夹状shRNA 唾液腺肿瘤 肌上皮细胞 蛋白多糖 | ||
| 来源期刊：《华西口腔医学杂志》2008年 第2期 | ||
| 收录数据库：中文科技期刊数据库 | ||
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