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两步法快速建立文蛤高重复性RAPD反应体系

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周波[1] 李红智[1] 林志华[2] 陆荣茂[2]

[1]温州医学院生命科学学院生物系,浙江温州325035 [2]浙江省海洋水产养殖研究所,温州325005

《水利渔业》

2007年第27卷第3期

摘　　要:

针对RAPD技术重复性不理想的问题,以3个文蛤群体为研究材料,确立“两步法”建立高重复性RAPD优化体系。第一步初筛,即以正交分析法对文蛤RAPD反应体系中各关键组分（DNA模板、引物、dNTPs、Mg^2＋、Taq聚合酶）,均设4个水平进行分析,确定两个待选体系;第二步检测,即以本研究中创立的重复性检测方法对待选方案进一步筛选。结果表明：初筛的两个反应条件体系Ⅰ和体系Ⅱ尽管在扩增条带的产量方面无明显差异,但体系Ⅱ各重复性检测指数明显高于体系Ⅰ;体系Ⅱ为更适合文蛤的RAPD高重复性反应体系。“两步法”中采用的多因素联合优化方案和RAPD重复性检测方法对RAPD技术的改善具有一定的指导意义。 (共3页)