μ-calpain激活因子UK114的克隆与序列分析

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摘　　要:

构建了山羊肝脏cDNA文库，采用平板裂解法提取噬菌体DNA，以此为模板用所设计的引物以PCR法扩增出μ-calpain激活蛋白UK114基因，并克隆到pGEM-Teasy载体。序列分析表明，UK114 cDNA包括起始密码子和终止密码子在内全长共计1017bp，5＇非编码区长为39bp，3＇非编码区长为567 bp，编码区长411 bp，编码137个氨基酸序列。与GenBank中Colombo等所得UK114基因比较表明：在5’非编码区，UK114为102 bp，克隆的UK114为39 bp，且二者仅有9个核苷酸序列是相同的；紧接着是起始密码子ATG，然后是一个411bp的阅读框（40nt-450at），编码137个氨基酸，理论分子量约为15ku，二者在编码区仅有1个bp不同，为无义突变；在3’非编码区为552 bp，所克隆的UK114为567 bp，二者在此区域有57个核苷酸序列是不同的：UK114为polyA，所克隆的是不同的核苷酸。二者的同源性为91％，突变的86个核苷酸中都为无义突变，开放阅读框中仅有一个核苷酸突变。