番鸭（Cairina moschata）睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的提取及性质研究

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摘　　要:

以番鸭睾丸为材料,通过硫酸铵沉淀分级分离、DEAE-32离子交换柱层析和Sephadex G-100分子筛柱层析纯化,获得比活力为19.18 U/mg、纯化倍数为6.46倍的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂。以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学。结果表明：酶的最适pH为5.6,该酶在pH3.0～7.6区域较稳定,而在pH〉7.6能很快失活;酶的最适温度为55℃。当温度为80℃时,酶完全失活。在40℃以下处理30 min,酶活力保持稳定,高于45℃,酶稳定性较差。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得米氏常数Km为0.215 mmol/L,最大反应速度Vm为5.54μmol/L.min。酶催化pNP-β-D-GlcNAc反应的活化能为69.05kJ/mol。金属离子对酶的效应试验表明：高浓度的Na＋和K＋对酶有抑制作用;Mg^2＋对酶有轻度激活作用,Cu^2＋、Pb^2＋、Zn^2＋、Ca^2＋、Ba^2＋对酶活力有不同程度的抑制作用;Al3＋对酶有抑制作用。