刚地弓形虫P30（SAG1）重组抗原的高效表达和体外纯化

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摘　　要:

目的表达和纯化弓形虫P30（SAG1）蛋白，为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制奠定基础。方法PCR法从弓形虫基因组DNA中扩增P30基因片段，P30产物克隆到表达质粒pET，30a（＋）构建重组载体，将其转化到DH5α中。经PCR扩增和质粒酶切及基因测序鉴定后，阳性重组质粒转化到大肠埃氏菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导，表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。大量的诱导表达产物用SNBC 3S NTA Resin方法纯化并进行复性。结果扩增的P30基因片段为750bp，重组表达融合蛋白量单位为30ku，与理论值相符。结论成功构建重组体。获得纯化和复性的弓形虫主要表面抗原P30的高效表达产物，为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础。 (共5页)