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人MCHR2真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立

袁成福 杨俊霞 魏丽丽 石华 陈济 宋方洲   重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 教育部临床检验诊断学重点实验室 重庆400016
摘要:目的 构建人MCHR2真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、Western blot及免疫荧光法检测MCHR2的表达。结果 成功构建了pcDNA3.1(+)/MCHR2真核表达载体,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达目的基因。结论 真核表达载体成功构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究MCHR2的功能奠定良好的实验基础。
格式:PDF     页数:4 页     页码范围:32-35页
学科分类:
关 键 词:MCHR2 真核表达载体 稳定转染的CHO细胞系 基因表达
来源期刊:《第三军医大学学报》2007年 第1期
收录数据库:中文科技期刊数据库
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