摘 要:
目的：应用分子生物学技术，构建胰腺十二指肠同源框蛋白1（Pdx1）和神经分化因子1（NeuroD1）转录因子真核表达质粒，检测其能否在真核细胞中有效表达并诱导人肝细胞转分化的能力。方法：以人胚胎胰腺组织mRNA为模板经RT—PCR扩增获得Pdx1和NeuroD1基因，分别克隆到真核双表达载体pIRES质粒的多克隆位点A（MCSA）和B（MCSB）中，构建pI／Pdx1／NeuroD1真核表达质粒，并转染L02细胞。用RT—PCR、免疫组化、间接荧光法和Westernblotting检测目的基因及NK转录因子相关的Nkx6．1（Nkx6．1）和葡萄糖运载体2（GLUT2）的表达情况。结果：目的基因克隆正确且在真核细胞中有效表达；并可诱导肝细胞表达胰腺B细胞功能相关的Nkx6．1和GLUT2因子。结论：pI／Pdx1／NeuroD1质粒成功构建和在人真核细胞表达，并诱导人肝细胞表达B细胞功能相关的Nkx6．1转录因子和GLUT2，提示Pdx1与NeuroD1可诱导肝细胞向胰腺内分泌细胞分化。
