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RNA干扰沉默神经干细胞Nogo-66受体基因阻断Nogo-66抑制神经突生长作用的研究

《中国修复重建外科杂志》2007年 第6期 | 王丰 朱悦   中国医科大学附属第一医院骨科 沈阳110001
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摘 要:目的检测Nogo-66是否对大鼠脊髓来源神经干细胞分化形成的神经元具有神经突生长抑制作用,以及其抑制作用是否可以通过沉默Nogo-66受体(Nogo-66 receptor,NgR)基因的方法进行阻断。方法体外培养大鼠脊髓来源神经干细胞,经小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染以沉默NgR基因表达,用免疫荧光法和Western blot检测神经干细胞在转染前后NgR基因的表达。取神经干细胞分为四组,均在含10%胎牛血清的培养基中分化。对照组不加干预因素;Nogo-P4组在分化过程中加入Nogo-66的活性片段Nogo-P4;siRNA组神经干细胞经siRNA转染使NgR基因表达沉默后开始分化;siRNA加Nogo-P4组神经干细胞经siRNA转染后在含有10%胎牛血清和Nogo-P4的培养基中分化。免疫荧光法标记分化形成的神经元,测量神经突长度,比较各组神经突长度的变化。结果悬浮培养的细胞形成典型的神经球,经免疫荧光检测Nestin表达阳性。加入10%胎牛血清分化1周后,可观察到神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白质和髓鞘碱性蛋白标记阳性的细胞。siRNA转染后24h,大部分神经干细胞NgR基因染色转为阴性,Western blot检测神经干细胞NgR基因表达显著降低,NgR基因阻断效率为90.35%±3.10%。神经干细胞分化第3天形成的神经元神经突长度在对照组为97.80±6.97μm,Nogo-P4组为80.54±6.75μm,siRNA组为92.14±7.27μm,siRNA加Nogo-P4组为94.01±8.37μm。Nogo-P4组与其他各组比较差异有统计学意义(P〈0.01),对照组、siRNA组和siRNA加Nogo-P4组间比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论Nogo-66对神经干细胞分化形成的神经元有神经突生长抑制作用,可以通过RNA干扰技术使神经干细胞NgR基因表达沉默,并阻断Nogo-66抑制神经突生长的作用。
【分 类】【生物科学】 > 生物工程学(生物技术) > 细胞工程 > 细胞、组织培养技术【生物科学】 > 分子生物学 > 基因工程(遗传工程) > 基因的表达
【关键词】 神经干细胞 Nogo-66 Nogo-66受体 RNA干扰
【出 处】 《中国修复重建外科杂志》2007年 第6期 642-647页 共6页
【收 录】 中文科技期刊数据库