摘 要:
目的 研究人造血增效因子（hHSF）C末端结构与其趋化活性的关系。方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段，分别重组到pET30a或pET42a中，并在E.coli BL21（DE3）中进行表达。hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化，融合蛋白GST-hHSF1-53经亲和层析、肠激酶（EK）酶切和凝胶过滤法进行分离纯化。hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定，用飞行时间质谱法测定其相对分子质量，用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞（PMN）趋化活性。结果测序证实合成的hHSF1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致，hHSF1-66／1-59表达量占菌体总蛋白的20％左右，主要以包涵体形式存在。GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30％以上，主要以可溶形式存在。3种目的蛋白纯度均达95％左右，它们的相对分子质量分别为7206．0、6401．2和5697．3D，均具有全长hHSF的免疫学活性。与全长hHSF相比，hHSF1-66（缺失3个氨基酸）对人PMN最大趋化活性（CI）（50nmol/L）没有明显差异，hHSF1-59（缺失10个氨基酸）和hHSF1-53（缺失16个氨基酸，α螺旋完全缺失）最大趋化活性分别下降34．3％和70．5％。结论hHSFC末端结构，特别是α螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用。 (共5页)
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