生物学 >> 湖南农业大学学报：自然科学版 >> 2003年29卷3期 >> 摘要

玉米细菌性枯萎病菌16S rDNA基因克隆及TaqMan探针实时荧光PCR

评论推荐

下载全文

漆艳香[1] 肖启明[1] 朱水芳[2]

[1]湖南农业大学植物保护学院,湖南长沙410128 [2]国家质检总局动植物检疫实验所,北京100029

《湖南农业大学学报：自然科学版》

2003年第29卷第3期

摘　　要:

为给农业和植物检疫部门提供一种特异性强、灵敏度高，可以快速、直接检测植物病原菌的方法，将玉米细菌性枯萎病菌16S rDNA基因克隆测序，根据该细菌与其他细菌菌株16S rDNA序列差异，设计出对玉米细菌性枯萎病菌具有稳定点突变的特异性探针，除泛菌属3个种和欧氏菌属3个种外，还对假单胞菌属1个种，黄单胞菌属1个种，棒形杆菌属1个种，短小杆菌属1个种以及5种植原体进行了实时荧光PCR检测．结果表明：只有玉米细菌性枯萎病菌产生荧光，其他细菌和植原体都没有荧光产生．检测的灵敏度为10^4CFU／mL的菌悬浮液，相当于4个细菌细胞的基因，灵敏度高，也就是说，反应体系中只要有2个活细菌，实时荧光PCR就能检测到．相对灵敏度为10^7CFU／mL，而且整个检测过程只需2h，由于实验采用独特全封闭反应管及光电传导系统，不用凝胶电泳，降低了污染． (共5页)