大口黑鲈原代肝细胞的培养及其应用于CYP450活性的诱导

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摘　　要:

体外培养大口黑鲈（Micropterus salmoides）原代肝细胞，观察其在培养过程中的形态变化，同时检测培养上清液中的乳酸脱氢酶（LDH）、白蛋白（ALh）含量，从而判定肝细胞的增殖和代谢能力，进而应用于CYP450的诱导研究。结果表明：培养5d后，肝细胞连接成片，分裂增多；培养至7d，细胞渐至单层；14d后，细胞停止生长，出现老化迹象。培养至第3—4天的细胞上清液中LDH的渗出量呈上升趋势，在第4天时达到峰值，随着培养时间的延长，肝细胞的酶渗出量逐渐减少。ALh的分泌量在第3—5天呈上升的趋势，第4—8天维持在较高水平，在第5天达到最高，此后随着培养时间的延长，ALb的分泌量呈下降趋势，故选择培养至第5天的大口黑鲈肝细胞应用于CYP450酶系中的氨基比林-N-脱甲基酶（ANDM）的诱导研究。40μM利福平诱导24h后，ANDM活性最高。ANDM的诱导研究为鱼类细胞药物代谢酶体外诱导奠定基础。