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改良分子信标-双重实时荧光PCR快速检测SARS病毒

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扈庆华[1] 刘小立[1] 庄志雄[1] 石晓路[1] 何雅青[1] 刘建军[1] 王冰[1] 刘涛[1] 张永有[2] 李庆阁[2] 赵锦[1] 何建凡[1] 杨洪[1] 房师松[1] 张丹[3] 周俊安[3]

[1]深圳市疾病预防控制中心,深圳518020 [2]厦门大学生命科学学院,深圳518020 [3]深圳市卫生局,深圳518020

《卫生研究》

2005年第34卷第4期

摘　　要:

目的建立改良分子信标一双重实时荧光PCR检测SARS病毒的方法，用于SARS的早期诊断和动物溯源。方法利用改良分子信标技术、装甲RNA和双片段双色荧光技术，根据GenBank公布的SARS病毒聚合酶基因1b的阅读开放框架结构的保守序列，自行设计一对引物和探针，以部分临床标本的酶联吸附实验结果和传统细胞培养方法作为对照，建立分子信标检测SARS病毒的方法。对368份临床标本(咽漱波、血液、粪便、尿液)、52份细胞培养液和50份动物标本进行荧光PCR扩增。结果分子信标检测SARS病毒的方法灵敏度为10～100个拷贝／ml，与流感病毒等呼吸道病毒无交叉反应。分子信标检测368份临床标本，20份阳性。其中确诊病例阳性率为21．27％(10／47)，确诊病例的咽漱液阳性率为43.48％，还分别从粪便和血清中检测到SARS病毒。52份细胞培养液，29份阳性，阳性率为55．77％。50份动物标本，23份阳性，阳性率为46％。结论改良分子信标一双重实时荧光PCR检测SARS病毒方法灵敏度高、特异性强，可用于SARS的临床早期诊断和动物溯源。 (共3页)