家蚕丝素-RGD融合蛋白的盐析纯化工艺探讨

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摘　　要:

利用基因重组技术合成了具有良好细胞粘附活性的重组家蚕丝素-RGD融合蛋白质（Silk-RGD），探讨了其盐析的工艺条件。研究发现，在融合蛋白等电点pH8附近，当硫酸铵在溶液中的饱和度较低（10％）时，其蛋白质沉淀量随着温度的升高而增加；当硫酸铵的饱和度升至20％时，蛋白质沉淀量不再随着温度的变化而变化，但与低饱和度硫酸铵时相比，沉淀量明显增加；当硫酸铵的饱和度升至30％或以上时，沉淀中杂蛋白含量明显增多，不利于目的蛋白的纯化。Silk—RGD融合蛋白相对合理而且易操作的盐析纯化条件为：pH8，硫酸铵在溶液中的饱和度为20％，室温（约20℃）。利用该工艺条件，可以低成本、高效率地生产Silk—RGD融合蛋白，从而满足新型材料规模化开发的需要。