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田野菟丝子ISSR-PCR反应体系的建立与优化

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李建辉[1,2] 金则新[2] 李钧敏[2]

[1]杭州师范学院生命科学学院,浙江杭州 310018 [2]台州学院生态研究所,浙江临海 317000

《江苏农业科学》

2007年第卷第4期

摘　　要:

利用ISSR技术对田野菟丝子的遗传多样性进行了研究,通过筛选引物并对影响PCR扩增效果的一些因素如Mg2＋浓度、牛血清白蛋白浓度、4×dNTP浓度、模板DNA用量、引物用量、Taq DNA聚合酶用量以及退火温度等指标进行优化,建立了可用于田野菟丝子ISSR分析最适宜的反应体系：10 μl PCR反应体积中,1×Taq酶配套缓冲液（10 mmol/L Tris·HCl,pH值9.0,50 mmol/L KCl,0.1% Triton X-100）,2.5 mmol/L MgCl2,2.0mg/ml牛血清白蛋白,0.2 mmol/L 4×dNTP,10 ng模板DNA,6 pmol引物,0.3 U Taq DNA聚合酶.引物UBC811的最适退火温度为50.7℃. (共4页)