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双价抗虫植物表达载体p3300-bt-pta转化苜蓿的初步研究

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熊恒硕[1] 康俊梅[1] 杨青川[1] 孙彦[2] 唐克轩[3]

[1]中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100094 [2]中国农业大学动物科技学院草地研究所,北京100094 [3]复旦大学生命科学院,上海200433

《中国草地学报》

2008年第30卷第1期

摘　　要:

以中苜1号无菌苗子叶为外植体，采用农杆菌介导的叶盘法，将含有CryIA（a）/CryIA（c）基因、半夏凝集素（pta）基因和bar基因的双价抗虫植物表达载体p3300-Bt-pta导入苜蓿子叶中，在含除草剂的筛选培养基中连续筛选，获得抗性转化植株。研究了农杆菌菌液浓度、浸染时间、共培养时间等因素对苜蓿转化效率的影响，结果表明：各因素对苜蓿转化率均有不同程度的影响，当转化的菌液浓度ODsoo为0．6、浸染时间为10min、共培养时间为3d时转化效率较好。载体的抗性基因为除草剂草丁膦抗性的Bar基因，对子叶外植体的最佳筛选浓度为8mg/L；抑制农杆菌所用Carb的有效工作浓度为400mg/L，以后继代逐次减少用量到100mg/L；按此方法以根癌农杆菌菌株EHA105介导，将双基因Bt和pta导入紫花苜蓿品种“中苜1号”，最终获得122棵除草剂草丁膦（ppt）抗性的植株，经过初步的PCR及RT-PCR分子生物学检测，有30棵检测到特异性条带，表明外源基因已成功整合到苜蓿基因组中，并在转录水平得到表达。 (共6页)