小鼠锌指蛋白基因Znf230条件基因打靶载体的构建
刘英[1] 刘运强[1] 周钦[2] 陶大昌[1] 彭艳[1] 刘合焜[3] 张思仲[1]
[1]四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室、医学遗传学教研室,成都610041 [2]四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室基因工程小鼠实验部,成都610041 [3]福建医科大学细胞生物学与遗传学系,福州350004
摘 要:
目的 构建用于小鼠锌指蛋白基因Znf230条件基因打靶的载体,为产生Znf230基因敲除的小鼠模型准备条件.方法 设计和合成引物,经PCR从小鼠的基因组中扩增出5＇同源臂、3＇同源臂及锚定序列,长度分别为4,4,1 kb的片段,反向插入pBS载体的neo基因的两侧,从而构建小鼠Znf230条件基因打靶载体Znf230-pBS（5）.结果 经过限制性内切酶及DNA测序鉴定,证实该条件基因打靶载体含有的同源序列与Genebank公布的基因序列一致,表明载体构建成功.结论 PCR技术和定向克隆技术是构建条件基因打靶载体简单而可靠的方法.运用该技术可获得小鼠锌指蛋白基因Znf230的条件基因打靶载体.
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