千年桐SAD基因克隆与分析及其丝状真菌表达载体构建

范妙华[1] 李纪元[1] 范正琪[1] 田敏[1] 倪穗[2]

[1]中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江富阳311400 [2]宁波大学,浙江宁波315211

摘  要:

以发育中的千年桐种子总RNA为模板,通过RT—PCR方法扩增得到硬脂酰脱饱和酶基因SAD的cDNA序列。该序列长度为1191bp,编码396个氨基酸。推测的分子量为45541.01U,等电点pI为6.05。BLAST分析表明,该cDNA序列与其它已登录的SAD基因cDNA序列一致性最高可达93.1%;编码的氨基酸蛋白序列性一致最高为89%。同时,构建了由构巢曲霉3一磷酸甘油醛脱氢酶基因的gpdA启动子驱动的丝状真菌表达载体,通过冻融法转入农杆菌中,PCR鉴定表明,pBAR-SAD已转入农杆菌EHAl05中,成功构建了农杆菌工程菌株。

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