SSH法结合定量PCR技术研究双肌臀猪肌肉组织的差异表达基因

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摘　　要:

利用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization，SSH)成功地构建了双肌臀与非双肌臀大白猪肌肉组织差异表达的消减cDNA文库，获得有效克隆686个．对整个文库测序分析，共获得587条有效序列．利用BLAST在线软件与GenBank、GenBank EST和Tigr Porcine EST等数据库进行同源序列比较，发现其中有11个未知新序列，可能代表“双肌臀”大白猪肌肉组织特异表达的新基因．对文库中所包含的兰尼啶受体基因(RYP1)、钙依赖性蛋白激酶基因(CAMK2)、人类胰岛素生长冈子结合蛋白-7基因(IGFBP7)，以及695号、882号和480号3个新基因进行了实时荧光定量PCR检测，结果显示：RYR1、CAMK2及IGFBP7基因在双肌臀猪肌肉组织RNA池中的表达量，分别为对照的非双肌臀猪肌肉组织RNA池中表达量的1．87、1．90和1．85倍；695号、882号和480号3个新的ESTs在双肌臀猪肌肉组织RNA池中的表达量为非双肌臀猪肌肉组织RNA池中表达量的1．48、1．44和1．78倍．这提示我们，上述基因的上调表达很可能与猪双肌臀性状的发乍有密切的关系，可以作为研究该性状的候选基因．