生物学 >> 生物化学与生物物理进展 >> 2005年32卷4期 >> 摘要

一种可转移的重组工程系统pYM-Red的建立

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于梅[1] 周建光[1] 陈伟[2] 李山虎[1] 黄翠芬[1]

[1]军事医学科学院生物工程研究所,北京100850 [2]厦门大学生命科学学院,细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室,厦门361005

《生物化学与生物物理进展》

2005年第32卷第4期

摘　　要:

重组工程是近几年发展的新型遗传工程技术．以PCR扩增的线性低拷贝质粒pACYC184为载体，用Gap—repair方法从大肠杆菌DY330染色体上直接体内亚克隆了包括Red重组酶基因在内的长约6．7kb的基因序列，构建了pYM—Red重组质粒．在宿主菌W3110体内进行了染色体上galk基因的敲除，验证了Red重组酶的生物功能，并确定了影响pYM-Red重组效率的诱导时间和线性DNA片段用量．在42℃诱导10min和线性DNA打靶分子浓度为300ng时，pYM—Red的重组效率可达到大约每4000个电转存活细胞中有1个重组阳性克隆，分别比pKD46和pBR322-Red系统高5—6倍． (共6页)