生物学 >> 生物化学与生物物理进展 >> 2006年33卷3期 >> 摘要

用于库-库筛选体系的抗原表达载体的构建

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选择感染性噬菌体（SIP）技术是研究蛋白质相互作用的良好手段，体内SIP技术在理论上适于库-库筛选，而双载体共包装聚合噬菌体方式是一条有效途径．为构建适合库-库筛选的抗原表达载体，选用TG10载体作为基本载体进行改造，首先克隆噬菌体M13基因间隔区的序列插入TG10中得到质粒pTMI，克隆基因Ⅲ的N1N2区序列，并在其3’端加上一段G4T柔性多肽，将NIN2插入到pTMI载体中Lac启动子的下游得到pTMIN，化学合成Ptrc启动子序列替换pTMIN中的Lac启动子及部分功能基因序列，构建成抗原表达载体pTTMIN，化学合成c-myc的十肽表位插入到G4S后进行融合表达，采用ELISA和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测抗原的表达，结果显示抗原得到了融合表达．用抗体呈现载体对pTTMIN性能进行鉴定，结果表明抗原表达载体可以与抗体呈现载体高效的共包装．综合以上结果说明抗原表达载体构建成功，可望用于库-库筛选体系．